• • با توجه به این که کشورهای توسعه یافته نیز به صورت عملی و کامل بودجه آموزش وپرورش را از مالیات اخذ نمی کنند بنابراین تجربه این کشورها نیز محدود بود و نتوانست کمک چندانی در امر پژوهش حاضر بکند.

 

• همانطور که در فصل ۴ ملاحظه می شود بعضی از جداول بدون ارقام است به این دلیل که آموزش و پرورش استان سمنان از دادن ارقام و اطلاعات جلو گیری نمود.

 

 

 

 

 

منابع فارسی :

 

 

• استیگلتیز ،‌جوزف، جهانی سازی ومسائل آن،‌ترجمه: حسن گلریز ،‌تهران:‌نشرنی ، ۱۳۸۲.

 

 

 

• اف.جن ، ترجمه: حسن طائی ، مدل تخصیص بهینه بودجه بین دانشگاه های کشورها،‌فصلنامه پژوهش اموزش عالی ، شماره ۱۱-۱۲(پاییز وزمستان) ،۱۳۸۴.

 

 

 

• اف، دالی شو ،‌ترجمه :‌بهرم محسن پور ،‌گزیده مقالات دایره المعارف آموزش عالی ،‌چاپ اول ،‌موسسه پژوهش و برنامه ریزی اموزش عالی ،‌۱۳۷۶.

 

 

 

• ام ،‌مین ، ترجمه مهرناز روشنایی: گزیده مقالات دایره المعارف آموزش عالی ، جلد اول ،‌موسسه پژوهش وبرنامه ریزی ، چاپ اول ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• امین فر،‌مرتضی ف افت تحصیلی یااتلاف در آ.پ، فصلنامه تعلیم و تربیت (‌پاییز و زمستان،‌صص ۲۵-۷، ۱۳۸۰.

 

 

 

• او. فولتون،‌ترجمه :‌غلامعلی سرور ،‌تخصیص بهینه منابع در نظام اموزش کشور از طریق حمسه بازده اقتصادی سرمایه گذاری ،‌چاپ اول ،‌انتشارات سمت ، ۱۳۸۶.

 

 

 

• ای ،زید رمن ،‌ترجمه:‌عبدالحسین ، نفیسی : دانشنامه اقتصاد امزوش و پرورش ،‌جلد اول :‌اقتصاد آموزش و پرورش عمومی ،‌پژوهشکده تعلیم وتربت ، ۱۳۸۲.

 

 

 

• بار، رمون ،‌اقتصاد سیاسی ،‌ترجمه:‌منوچهر فرهنگ، تهران ، انتشارات سروش ، ۱۳۸۶.

 

 

 

• بختیاری ، پرویز و دیگران ، اصول و مفاهیم مالی و حسابداری برای مدیران ،‌چاپ سوم ، سازمان مدیریت صنعتی ، ۱۳۷۲.

 

 

 

• برنامه دوم توسعه اقتصادی اجتماعی فرهنگی جمهوری اسلامی ایران ، مصوب۲۰/۹/۷۴ مجلس شورای اسلامی ، انتشارات سازمان برنامه و بودجه، ۱۳۷۴-۱۳۷۳.

 

 

 

• بی .آر.هوگ، ترجمه: معصومه قارون ، مقالات دایره المعارف اموزش عالی ،‌جلد اول ،‌موسسه پژوهش و برنامه ریزی ، چاپ اول ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• پژویان ،‌جمشید ،‌اقتصاد بخش عمومی ،‌تهران ،‌جهاد دانشگاهی دانشگاه تهران ،‌چاپ اول، ۱۳۸۸.

 

 

 

• تودارو،‌مایکل ، توسعه اقتصادی در جهان سوم ،‌ترجمه غلامعلی فرجاری، چاپ سیزدهم، انتشارات کولف، ۱۳۸۷.

 

 

 

• توکلی ،‌احمد، مالیه عمومی ، تهران ،‌انتشارات سمت ،‌۱۳۸۴.

 

 

 

• ج، ساخاروپولوس ،ترجمه :‌مسعود عبدیان ، توسعه کمی آموزش عمومی درکشورهای درحال توسعه ، انتشارات مدرسه ، چاپدوم، ۱۳۸۵.

 

 

 

• ج، شاستر ،‌گزیده مقالات دایره المعارف اموزش عالی (جلد اول)‌ترجمه حسین لطف ابادی ،‌چاپ اول ،‌موسسه پژوهش و برنامه ریزی اموزش عالی ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• جعفری ، ناصر ، بررسی رابطه سرمایه گذاری در تحقیقات و رشد اقتصادی و ازمون آن در اقتصاد ایران ، پایان نامه کارشناسی ارشد ،‌دانشکده اقتصاد دانشگاه تهران ، ۱۳۸۳.

 

 

 

• جعفری ،‌ناصر ، بررسی رابطه سرمایه گذاری درتحقیقات و رشد اقتصادی وازمون آ» در اقتصاد ایران ، پایان نامه کارشناسی ارشد ،دانشکده اقتصاد دانشگاه تهران،‌۱۳۸۳.

 

 

 

• جلالیان ،‌احمد ،؛‌مطالعه هزینه ها درامر تعلیم وتربیت ،‌پایان نامه کارشناسی ارشد ،‌رشته علوم اجتماعی ،‌موسسه مطالعات و تحقیقات ،دانشگاه تهران ، ۱۳۶۸.

 

 

 

• جونز ، جی ،‌اقتصاد آموز شو پرورش ،ترجمه،مصطفی عانزاده ،‌اصفهان، جهاد دانشگاهی ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• حواریان ،‌علی ،‌طراحی الوی بهینه منابع مالی غیر پرسنلی سازمان اموزش و پروش استان لرستان شورای تحقیقات اموزش ،۱۳۷۸.

 

 

 

• خاکی ،‌غلامرضا ،‌روش تحقق در مدیریت ،‌تهران :‌دانشگاه ازاد اسلامی ، ۱۳۷۹.

 

 

 

• د.ب.جانسون،ترجمه: عبدالحسین نفسی ، دانشنامه اقتصاد اموزش و پرورش، جلد سوم، پژوهشکده تعلیم وتربیت ، ۱۳۸۲.

 

 

 

• د.ر.جونز،‌ترجمه:‌سمیرا کلهر ف راهکاری پیرامون تخصیص بهینه منابع دراموزش عالی ،‌فصلنامه پژوهش اموزش عالی ،‌۲۱و۲۲، ۱۳۸۰.

 

 

 

• دباغ ، رحیم، فصلنامه پژوهش و برنامه ریزی در آموزش عالی ، شماره ۱۳و۱۴۰ بهار و تابستان) صص۱۴۴-۸۰، سال ۱۳۸۶.

 

 

 

• دهقان پور ، مریه ،‌گزارش نهایی طرح پژوهش ارزیابی تحقیقات در زمینه اقتصاد اموزش و پرورش ایران در سالهای ۷۸-۴۵ فتهران وزارت ا.پ، ۱۳۸۷.

 

 

 

• دهقانی ، علی ،‌اقتصاد اموزش و پرورش، چاپ دوم، انتشارات آییژ،بهار ، ۱۳۸۸.

 

 

 

• ر.کوپ ، ترجمه:عبدالحسین نقیسی ،دانشنامه اقتصادی آموزش و پرورش ،‌جلد چهارم ،‌تهران:‌پژوهشکده تعلیم وتربیت ، ۱۳۸۲.

 

 

 

• راجرز ،‌وانیل سی ودیگران، اقتصاد آ.پ، ترجمه سید ابوالقاسم حسینیون، انتشارات استان قدس رضوی ، ۱۳۷۰.

 

 

 

• س.پ، میلار ،‌ترجمه: بابک نصریری ،‌بازده اقتصادی سرمایه گذاری اموزش در سطوح مختف ، تهران ،انتشارات سمت ، چاپ سوم ، ۱۳۷۹.

 

 

 

• ساخار و پولوس ،‌ج و ،‌وودهال ،‌م ، آموزش برای توسعه ترجمه، پریدخت وحیدی و حمید بهزادی ، تهران ، سازمان برنامه بودجه.

 

 

 

• ساخار و پولوس ،‌جرج و موریس و…، اموزش برای توسعه تحلیلی از گزینش هیا سرمایه گذاری‌،ترجمه : پریدخت وحیدی و حمید سهرابی ،انتشارات ، ۱۳۷۳.

 

 

 

• ساروخانی، باقر ،‌روش های تحقیق در علوم اجتماعی ، تهران : پژوهشکده علوم انسانی ومطالعات فرهنگی ، ۱۳۷۸.

 

 

 

• سی . فواید من ،‌‌هادی شیرازی بهشتی ،‌مجموعه مقالات اموزش عالی ،‌جلد اول ف موسسه پژوهش و برنامه ریزی ،‌۱۳۷۶.

 

 

 

• شهریاری ، ربابه ،تحلیل هزینه ، فایده اموزش عالی دولتی ایران ، پایان نامه کارشناسی ارشد ،دانشکده اقتصاد ،‌دانشگاه تهران ، ۱۳۷۷.

 

 

 

• صالحی ،‌داود،‌مبانی امور مال یو بودجه در آ.پ ، چاپ اول ، انتشارات قهر قم، ۱۳۷۹.

 

 

 

• عبدیان ، مسعود ،‌براورد مهم عامل موثر بر بودجه جاری دانشگاه ها ، فصلنامه پژوهش و برنامه ریزی دراموزش عالی شماره ۶( تابستان) ،۱۳۷۳.

 

 

 

• عرب مازار، علی اکبر ف مالیات و توسعه ،‌فصلنامه بهار وتابستان ،انتشارات سازمان امور مالیاتی کشور ،‌چاپ اول ، ۱۳۸۸.

 

 

 

• علاقه بند، علی ،‌مقدمات مدیریت آموزشی، انتشارات خرمی ،‌۱۳۸۰.

 

 

 

• فراگوسن ،‌ُِ‌،‌ای ، نظریه اقتصاد خرد ،‌ترجمه : محمود روزبهان ،‌تهران :‌مرکز نشر دانشگاهی ،‌۱۳۷۹.

 

 

 

• فرهمندی ،‌قومی ، محمد علی ،‌مطالعه هزینه های اموزش در بودجه کل کشور ،‌پایان ناکه کارشناسی ارشد ،دانشکده علوم انسانی ، دانشگاه تهران ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• فریدون ، علی اکبر ، راه های جلب مشارکت مردم در اموزش و پرورش ازدیدگاه انجمن اولیای مدراس در سمنان ، پایان نامه کارشناسی ارشد ، دانشکده علوم تربیتی ، ۱۳۷۶.

 

 

 

• قارون معصومه ، بررسی راه های تامین منابع مالی دانشگاه ها ،‌چاپ اول ،‌موسسه پژوهش آموزش عالی ،‌۱۳۷۶.

 

۲- مواد پپتیدی هضم شده حیوانی ۵Gms/lit
۳- محتویات بافتی ۵Gms/lit
۴- دکستروز ۴۰Gms/lit
۵- آگار ۱۵Gms/lit
طرز تهیه محیط سابرودکستروز آگار با توجه به توصیه کارخانه سازنده به این ترتیب می‌باشد که ۶۵ گرم از پودر محیط را با ۱۰۰۰ میلی لیتر از آب مقطر مخلوط کرده و در تماس مستقیم با حرارت قرار داده می‌شود و بعد از اینکه شفافیت مطلوب خود را دریافت نمود در داخل اتوکلاو به درجه حرارت ۱۲۱ درجه سانتی گراد و با فشار ۱۵ پوند به مدت ۱۵ دقیقه قرار داده می‌شود و همان طوری که توصیه شده است برای اینکه پودر در محیط در حین نگهداری کیفیت خود را از دست ندهد بایستی در یک مکان خشک و خنک به دور از نور نگهداری شود.

۳-۳-۱- محیط کشت سابرودکستروز آگار
بسته به حجم نمونه‌ای که از ملتحمه گاو ها اخذ گردیده است و با توجه به توصیه کارخانه سازنده ، محیط کشت آزمایشگاهی به روش زیر تهیه گردید.
ابتدا پودر به میزان لازم توسط ترازوی دیجیتالی اندازه گیری شده و با آب مقطر داخل یک بالن ریخته می‌شود . بعد از اینکه محلول حاوی محیط ، شفافیت خود را به دست آورد در داخل اتوکلاو گذاشته می‌شود (۱۲۱ درجه– ۱۵ پوند– ۱۵ دقیقه). در نهایت در درون پلیت ها ریخته شد. بعد از انعقاد محلول در داخل پلیتها محیط کشت سابرودکستروز آگار آماده گردید. لازم به ذکر است تمام مراحل فوق در کنار شعله صورت گرفت.
۳-۳-۲- کشت در محیط سابرودکستروز آگار
برای هر نمونه تهیه شده از هر چشم یک پلیت در نظر گرفته شد. این کار باید در کنار شعله و با بهره گرفتن از دستکش های استریل صورت گیرد. زیرا امکان پخش آلودگی از محیط انتقالی به اطراف وجود دارد. لذا این مرحله با احتیاط مضاعف و در کنار شعله صورت گرفت. برای کشت ، سواپ با ملایمت روی سطح محیط کشت به صورت یکنواخت کشیده شد و این در حالی است که نباید هیچ گونه فشار دست بر روی محیط وارد شود (محیط خراش بر ندارد).
بعد از کشت درب تمام پلیت ها توسط چسپ پارافیلم به شکل کاملاً محکم بسته شد و به مدت دو هفته در داخل انکوباتور در دمای ۲۸ درجه سانتی گراد به طور وارونه قرار داده شد تا قارچ ها به صورت کامل رشد کنند.
۳-۴- نمونه برداری حیوانات
برای انجام تحقیق حاضر در تاریخ ۱۵/۵/۱۳۹۲ به کشتارگاه واقع در شهرستان ارومیه جهت نمونه برداری مراجعه شد. از تعداد ۸۲ مورد کیسه ملتحمه چشم ۴۱ گاو هلشتاین نمونه گیری به عمل آمد. برای انجام این کار ، با بهره گرفتن از دماغ گیر گاو مقید می‌شد و پس از آرام شدن ، چشم حیوان از لحاظ وجود ضایعاتی همچون سرخی ملتحمه ، ریزش اشک ، عروقی شدن و کدورت قرنیه مورد مشاهده قرار می‌گرفت و در صورت عدم وجود مشکل ، نمونه گیری به عمل می‌آمد. بدین منظور سواپ‌های استریل که روز قبل در آزمایشگاه میکروبیولوژی تهیه شده بودند به درون کیسه ملتحمه چشم پایین کشیده می‌شدند و بلافاصله درون لوله های آزمایش حاوی محیط انتقالی آب پپتونه قرار می‌گرفتند. همزمان در یک برگه مشخصات دام شامل سن ، جنس و چپ و راست بودن چشم حیوان یادداشت می‌شد. پس از اتمام نمونه گیری ، نمونه ها در کنار یخ به آزمایشگاه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه منتقل شده و ۴۸ ساعت در گرم خانه ۳۷ درجه سانتی گراد نگهداری می‌شدند.
۳-۵- بررسی نتایج کشت
بعد از رشد کامل ، پرگنه های قارچی مورد بررسی قرار گرفت. قطعه‌ای از پرگنه در کنار شعله توسط آنس برداشته شده و روی لام قرار داده می‌شد (جهت تهیه لام وتمانت) و توسط لاکتو فنول کاتن بلو رنگ آمیزی می‌گردید. این در حالی است که قطعه برداشته شده توسط آنس کاملاً باز می‌گردید تا اجزای ساختمانی آن در زیر میکروسکوپ قابل رویت گردد. این کار با احتیاط کامل صورت می‌گرفت زیرا امکان دارد در حین خرد کردن به ساختمان قارچ آسیب وارد شود. بعد از آماده سازی گسترش ، توسط میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی ۱۰X و ۴۰X مورد بررسی قرار گرفت.
۳-۶- آنالیز آماری
تجزیه‌و‌تحلیل آماری داده‌ها با بهره گرفتن از نرم‌افزار SAS ویرایش ۲/۹ انجام پذیرفت تمامی داده‌ها بر اساس سطح احتمال پنج درصد (۰۵/۰>P) مورد بررسی قرار گرفتند.
برای تعیین تفاوت فراوانی جدایه ها در گروه سنی مختلف و جنس ها از آزمون من ویتنی و در مواردی که تعداد جدایه ها کم بود از آزمون دقیق فیشر استفاده گردید .برای تعیین همبستگی بین میزان جداسازی قارچ ها و سن گاوها از آزمون همبستگی کندال تاو استفاده شد.
فصل چهارم
نتایج
۴-۱- نتایج
تحقیق حاضر بر روی ۴۱ گاو سالم انجام گرفت. در کل از ۲۷ چشم (۹۳/۳۲% درصد ) ، تعداد ۳۴ جدایه (۶گونه ) شناسایی گردید.فراوانی قارچ های رشته ای به ترتیب زیر می باشد
آسپرژیلوس (۷۵/۴۳%)، کورولاریا(۷۵/۱۸%)، پنی سیلیوم (۶۲/۱۵%)، پزودوآلشریا (۶۲/۱۵%)، فوزاریوم (۱۲/۳%) و اسکوپولاریوپسیس (۱۲/۳%).
از ۲۴ راس گاو مثبت برای کشت قارچی ، تعداد ۳ راس (۳۲/۷ درصد) برای هر دو چشم مثبت بودند و تعداد ۱۶ راس (۳۹ درصد) فقط برای چشم راست مثبت بودند و تعداد ۱۱ راس (۸/۲۶درصد) فقط برای چشم چپ مثبت بودند و تعداد ۱۷ راس (۵/۴۱ درصد) برای هر دو چشم منفی بودند.
نتایج کشت از ۴۱ راس گاو و ۸۲ چشم ، تعداد ۲۴ چشم (۳/۲۹ درصد) واجد یک گونه قارچی بودند و تعداد ۳ چشم (۷/۳ درصد) واجد دو گونه قارچی و تعداد ۵۵ چشم (۱/۶۷ درصد) برای کشت قارچی استریل بودند.
۴-۲-جنس
در تحقیق حاضر ۲۵ راس (۶۱ درصد ) از گاو ها مربوط به جنس نر بودند و ۱۶ راس (۳۹ درصد ) مربوط به جنس ماده بودند از کل جدایه های حاصل از چشم گاو ها ،۱۹ جدایه (۹/۵۵ درصد ) مربوط به جنس نر و ۱۵ جدایه (۱/۴۴ درصد ) مربوط به جنس ماده بودند. ۱۰ راس از گاوهای نر (۴/۲۴ درصد ) و۷ راس از گاو های ماده (۱/۱۷ درصد ) فاقد جدایه های قارچی بودند.
۴-۳-چشم
تعداد ۲۰ جدایه (۸/۵۸درصد ) مربوط به چشم راست بودند و تعداد ۱۴ جدایه (۲/۴۱ درصد ) مربوط به چشم چپ بودند. ۲۵ چشم راست (۵/۳۰ درصد ) و ۳۰ چشم چپ (۶/۳۶ درصد ) از نظر حضور قارچ استریل بودند.
۴-۴-نتایج آماری
براساس آزمون مربع کای و در مواردی آزمون دقیق فیشر فراوانی جداسازی اسپرژیلوس فومیگاتوس در گاو های گروه سنی بالای یکسال از فراوانی معنی داری برخوردار بود (۰۲۲/۰P=)
براساس همین آزمون ها فراوانی پنیسلیوم نیز در همین گروه سنی از فراوانی معنی داری برخوردار بود (۰۲۴/۰P=)
تنها قارچی که در گروه های جنسی تفاوت آماری معنی داری نشان داد قارچ پزودوآلشریا با فراوانی معنی دار در گاو های نر بود (۰۴۹/۰P=).
جدول ۴-۱ : جدایه های قارچی کیسه ملتحمه چشم گاو هلشتاین سالم به تفکیک گروه سن

 

سن

<1 ۲۰n=

>1 ۲۰n=

<1 (درصد)

>1 (درصد)

تعداد جدایه

درصد جدایه

همبستگی )ارزش (p

ارزش P

معنی داری

• رضایت از عملکرد، موجب رضایت شغلی می شود و نه برعکس.

 

• بررسی ها نشان داده، رضایت شغلی، در جابه جایی و غیبت کارکنان تاثیر دارد. یعنی کارکنانی که رضایت شغلی شان بالاست، نسبت به کارکنانی که رضایت کمتری دارند غیبت و جابه جایی شان هم پایین تر است.

 

• افرادی که رضایت شغلی دارند، اغلب دوست دارند در محل کارشان حضور داشته باشند (مقیمی، ۱۳۸۶).

 

۲-۳-۹- پیش زمینه های رضایت شغلی
برخی از محققان دیدگاه تعامل گرایانه انطباق فرد با شغل را اتخاذ کرده اند که رویکردهای محیطی و شخصیتی را در بر می گیرد. در رویکرد انطباق فرد با شغل گفته می شود که افراد مختلف، ویژگی های شغلی متفاوتی را ترجیح می دهند. در دیدگاه مزبور تلاش بر این است که مشخص شود چه افرادی، چه نوع شرایط شغلی را می پسندند. رضایت شغلی از این دیدگاه حاصل سازگاری مناسب میان فرد و شغل است. شکل ۲-۳-۳ هر سه دیدگاه محیطی، شخصیتی، و تعاملی را نشان می دهد (اسپکتور، ترجمه محمدی، ۱۳۸۷).
شکل ۲-۳- ۳- سه الگویی که نشان دهنده (الف) تأثیر محیط بر رضایت شغلی، (ب) تأثیر شخصیت بر رضایت شغلی، (پ) تأثیر محیط و شخصیت بر رضایت شغلی هستند
(اسپکتور، ترجمه محمدی، ۱۳۸۷)
۲-۳-۹-۱- پیشینه های محیطی رضایت شغلی
شواهد تحقیقی متعدد نشان می دهند که وجوه مختلف و محیط شغل با رضایت شغلی همبستگی دارند. به عبارت دیگر، برخی از شرایط باعث ایجاد رضایت شغلی می شوند و برخی دیگر عامل نارضایتی هستند. در این بخش بر ویژگی های تکالیف شغلی، دستمزدها، عدالت در محیط کار و تأثیر آنها بر ایجاد شرایط استرس زا نگاهی خواهیم داشت.
۲-۳-۹-۱-۱- ویژگی های شغل
ویژگی های شغل به محتوا و ماهیت تکالیف شغلی اشاره دارند. فقط چند ویژگی به عنوان عامل مؤثر بر رضایت شغلی مورد مطالعه قرار گرفته است(اسپکتور، ترجمه محمدی، ۱۳۸۷). پنج ویژگی در بخشی از نظریه هاکمن و الدهام^[۱۲۰] (۱۹۷۶) به ویژگی های مؤثر بر رضایت شغلی مربوط می شود:

 

• • تنوع مهارت (میزانی که شغل به تنوعی از فعالیت­ها برای انجام کار نیازمند است)،

 

• اهمیت وظیفه (میزانی که شغل فرد روی زندگی و شغل سایر افراد تأثیر می­ گذارد)،

 

• ماهیت شغل (میزانی که شاغل یک کار را به طور کامل انجام می­دهد)،

 

• آزادی عمل در کار (میزانی که شغل بتواند به هنگام برنامه­ ریزی کار و تعیین روال کار، به فرد آزادی، استقلال و اختیار دهد) و

 

• بازخورد (مقدار فعالیت­های کاری که برای به دست آوردن نتایج کار فرد از طریق اطلاهات مستقیم و روشن درباره اثربخشی­اش لازم است)، که این مولفه ها با انگیزش شغلی ارتباط دارند (مولر و فیتزگرالد^[۱۲۱]، ۱۹۸۵؛ به نقل از فرجی و همکاران، ۱۳۸۷).

 

جدول ۲-۳- ۳- حوزه ویژگی های شغل و همبستگی معنادار آنها با رضایت شغلی در فراتحلیل فراید و فریز (۱۹۸۷)
(اسپکتور، ترجمه محمدی، ۱۳۸۷)

ویژگی ها
همبستگی معنادار
توصیف ویژگی

تنوع شغل
۲۹/۰
تعداد مهارت های لازم برای انجام دادن شغل

مشخصه وظیفه
۲۰/۰
آیا کارمند بخشی از شغل را انجام می دهد یا تمام آن را؟

معناداری وظیفه
۲۶/۰
تأثیر شغل بر سایر افراد

اختیار
۳۴/۰
کارمندان برای انجام دادن شغل بر اساس صلاح دید خویش آزادی دارند

تعریف پیرنگ در اصل، از فن شاعری ارسطومایه می‌گیرد.ارسطو، پیرنگ را متشکل از سه بخش می‌داند: آغاز که حتماً نباید در پی حادثه‏ی دیگری آمده باشد، میان که هم در پی حوادثی آمده و هم با حوادث دیگری دنبال می‌شود، و پایان که پیامد طبیعی و منطقی حوادث پیشین است.
از نظر ارسطو، پیرنگ ایده‌آل از چنان همبستگی و استحکامی برخوردار است که اگر حادثه‌ای از آن حذف یا جا‍‌به‌جا شود، وحدت آن به کلّی درهم می‌ریزد‌‎.پیرنگ با عناصری چون «شخصیت» و «کشمکش» پیوستگی و رابطۀ نزدیکی دارد و ممکن است به واژگونی و کشف منتهی شود (داد، ۱۳۹۰: ۹۹-۱۰۰).
نقشه و الگوی رویدادهای یک نمایش یا شعر یا اثر داستانی را که سازماندهیِ حادثه و شخصیت را به عهده می‌گیرد، پیرنگ می‌گویند بدان صورت که حس کنجکاوی و تحریک خواننده یا بیننده را برانگیزد.
ای.ام.فورستر تعریف ساده اما بسیار مفیدی از طرح (پیرنگ) به‌دست می‌دهد: داستان، روایت رویدادهایی است که در توالی زمانی منظم شده باشد. طرح نیز روایت رویدادهاست که در آن بر تصادف تأکید شده باشد. (کادن، ۱۳۸۶: ۳۳۲)
۲-۲-۱-۱٫ انواع طرح (پیرنگ)
پیرنگ را به دو دسته تقسیم می‏کنند: پیرنگ بسته و پیرنگ باز.
۲-۲-۱-۱-۱٫ پیرنگ بسته
در پیرنگ بسته بر خلاف پیرنگ باز نویسنده از قبل چگونگی روابط علّت و معلولی را بیان می‌دارد و این غایت داستان را رقم می‏زند‏. به طوری‏که می‏توان از همان آغاز داستان فهمید که آخر داستان چه خواهد شد و برداشت و ذهن خواننده هیچ نقشی در این میان ندارد در پیرنگ بسته این ذهن و تخیّل خواننده نیست که فرصت جولان و اندیشه دارد‏، بلکه نویسنده است که با در کنار هم قرار دادن روابط علّت و معلولی و سایر عناصر داستانی برای آن‏، انجام و نهایتی را رقم می‏زند .‏

«پیرنگ بسته‏، پیرنگی است که از کیفیتی پیچیده و تو‏در‏تو و خصوصیّت فنی نیرومند برخوردار باشد‏؛ به عبارت دیگر‏، نظم ساختگی حوادث بر نظم طبیعی آن بچرخد‏.
این نوع پیرنگ معمولاً در داستان‏های اسرار آمیز و رمان‏های پلیسی و جنایی به کار گرفته می‏شود که نتیجه‏گیری قطعی و محتومی دارد‏، مثل اغلب داستان‏های ادگار آلن‌پو که دارای پیرنگ بسته است و نظم حوادث بیشتر ساختگی و تخیّلی است تا واقعی و طبیعی‏؛ داستان‏ها از ضابطه‌ی علّت و معلولی محکمی پیروی می‏کنند و در خصوصیّت تکنیکی آن‏ها افراط شده است‏. ‏نویسنده در پیرنگ بسته بیشتر به استحکام اجزای پیرنگ داستان توجه دارد تا حقیقت مانندی آن‏» (میرصادقی، ۱۳۷۶ : ۶۷).
۲-۲-۱-۱-۲٫ پیرنگ باز
«‌پیرنگ باز‏، پیرنگی است که در آن نظم طبیعی حوادث‏،‌بر نظم ساختگی و قراردادی داستان غلبه کند‏. در داستان‏هایی که پیرنگ باز دارند‏، اغلب گره گشایی مشخص وجود ندارد یا اگر داشته باشد زیاد به چشم نمی‏زند‏، به عبارت دیگر نتیجه‏گیری محتومی که در پیرنگ بسته وجوددارد‏، در پیرنگ باز دیده نمی‏شود و اگر هم دیده شود‏، قطعی نیست‏. در داستان‏هایی با پیرنگ باز نویسنده سعی می‏کند خود را در داستان پنهان کند تا داستان چون زندگی‏، عینی‏، ملموس و بی‏طرفانه جلوه کند‏. از این‏رو‏، اغلب به مسائل مطرح شده پاسخی قطعی نمی‏دهد و خواننده خود باید راه حل آن‏ها را پیدا کند‏. آنتوان چخوف یکی از اولین نویسندگانی است که به نوشتن داستان با پیرنگ باز توجه بسیار نشان می‏دهد‏. در پیرنگ باز‏، نویسنده بیشتر به حقیقت مانندی داستان توجه دارد» (‏میرصادقی‏، ۱۳۷۶ : ۶۶).
۲-۲-۱-۲٫ عناصر ساختاری طرح (پیرنگ)
الف)گره افکنی
فاصله میان نقطه آغاز تا نقطه بحران گره افکنی نامیده می‏شود.«در ساخت نمایش و داستان، آن بخش که از آغاز عمل تا نقطه­ی بحران، یعنی گره‌گشایی ادامه می‌یابد، گره‌افکنی گویند» (شهریاری، ۱۳۶۵: ۲۵۳).
گره شامل چالش‏ها و کش و قوس‏هایی است که داستان را به مقصدنهایی نزدیک می‏کند. در داستان کوتاه این گره‏ها کم و در رمان زیاد و مرتبط به هم هستند. به عبارت دیگر،گره افکنی به هم انداختن حوادث و اموری است که طرح داستان و نمایش‏نامه را گسترش می‏دهد. وضعیت و موقعیت دشواری است که بعضی اوقات به طور ناگهانی ظاهر می‏شود و برنامه‏ها و راه و روش‏ها و نگرش‏هایی که وجود دارد تغییر می‏دهد.
گره افکنی، وضعیت و موقعیت دشواری است که بعضی اوقات به طور ناگهانی ظاهر می‏شود و برنامه‏ها، راه و روش‏ها و نگرش‏هایی را که وجود دارد، تغییر می‏دهد. در داستان، گره افکنی شامل خصوصیات شخصیت‏ها و جزئیات وضعیت و موقعیت‏هایی است که خط اصلی پیرنگ را دگرگون می‏کند و شخصیت اصلی را در برابر نیروهای دیگر قرار می‏دهد و عامل کشمکش را به وجود می‏آورد.
«گره‌افکنی، به هم انداختن حوادث و اموری است که پیرنگ داستان و نمایش‌نامه و فیلم‌نامه را گسترش می‌دهد، به عبارت دیگر، وضعیّت و موقعیّت دشواری است که بعضی اوقات به­ طور ناگهانی ظاهر می‌شود و برنامه‌ها، راه و روش‌ها و نگرش‌هایی را که وجود دارد، تغییر می‌دهد» (میرصادقی، ۱۳۸۲: ۲۹۵).
گره­افکنی در داستان نقطه­ی محوری تلاقی امور، قلب تپنده و مرکز ثقل داستان است. گره، آن نقطه­ی حادثه یا ماجرای مهم، حساس و سرنوشت‌سازی است که داستان در آن به اوج خود می‌رسد. گره در خود شاید هیچ حادثه­ی مهمّی نباشد و هیچ مسأله­ مهمّی را در داستان توضیح ندهد، اما حادثه یا ماجرایی است که داستان برای توضیح آن یعنی برای توضیح علل رویداد آن یا توصیف دقیق چگونگی رویداد آن نوشته می‌شود. به عبارت دیگر گره در داستان همواره حادثه یا امری است که توضیح آن مهم‌تر از اشاره به رویداد آن است و داستان در کلیّت خود به نوعی، توضیحی برای رویداد آن است. از سویی گره همچنین نقطه چرخش داستان است. گره، حادثه یا ماجرایی است که به داستان سمت و سویی معیّن می‌دهد و آن­را از یک گزارش معمولی امور به گزارش تخیّلی اموری شگفت و جالب تبدیل می‌کند. گره، گاه، آن حادثه یا ماجرایی است که سیر عادی و طبیعی امور را به هم می‌زند و باعث وقوع حوادثی می‌شود که در اثر به تصویر در می‌آیند. گاه نیز گره، حادثه یا حرکتی است که تحولّی را در زندگی شخصیت‌ها، دامن می‌زند و آن‏ها را به ماجراجویی و تجربه‌های نو یا کنار آمدن با خود و قبول وضعیّت خود می‌کشاند. از این رو، تنها در پرتو فهم آن می‌توان کلیّت داستان یا نکاتی را که داستان در اصل به دنبال طرح آن است، فهمید. (محمودیان، ۱۳۸۲: ۹۷).
عامل گره­افکنی باید همواره از نظم خاصّی که در بر گیرنده­ی سه نکته است، پیروی کند:
اول این­که انتخاب گره‌هایی که بررسی آن‏ها بعدی از ابعاد وجودی و جنبه‌هایی از احساسات و افکار شخصیّت را در راستای هدف نویسنده، مشخص کند.
دوم این­که، گره‌ها چنان ترکیب یابند که گره­گشایی یکی از آن‏ها، مقدمه‌ای برای روشن شدن ویژگی‌های بعدی باشد.
در نهایت، نویسنده به هنگام گره­افکنی باید خواننده را به اوج هیجان و احساسات برساند (انوشه، ۱۳۷۶: ۱۱۷۷).
ب)بحران
در فرایند داستان استمرار،جاافتادگی و پیچیدگی گره افکنی به بحران می‏انجامد. پس بحران را نمی‏توان از گره‏افکنی جدا و منفک کرد. بحران داستانی در خواننده حالت «انتظار»پدید می‏آورد. این حالت به داستان تعلق ندارد،بلکه واکنش خواننده به داستان است. انتظار انگیزی‏،محصول یک داستان خوب است نه بخشی از آن. انتظار عبارتست از تردید خواننده نسبت به کنش،دیالوگ و تفکر شخصیت‏های داستان. انتظار در داستان موجب می‏شود که خواننده از خود بپرسد:«بعد چه می شود؟»
بحران، لحظه‏ای است که نیروهای متقابل برای آخرین بار با هم تلاقی می‏کنند و عمل داستانی را به نقطه‏ی اوج یا بزنگاه می‏کشانند و موجب دگرگونی زندگی شخصیت یا شخصیت‏های داستان می‏شوند و تغییری قطعی در خط اصلی داستان به وجود می‏آورند.
پ) کشمکش و ناپایداری
«اغلب در هر داستانی «شخصیت اصلی» یا «شخصیت مرکزی» با قدرتی که علیه او قیام کرده او به مجادله بر می‏خیزد. این نیرو و قدرت می‏تواند شامل اشخاص‏، اجسام، موانع اجتماعی، خصلت خود شخصیت‏ اصلی داستان باشد که با او سر مخالفت دارد» (میرصادقی، ۱۳۸۸: ۷۴- ۷۱).
کشمکش، مقابله دو نیرو یا دو شخصیت است که بنیاد حوادث را می‏ریزد. غالباً وقتی «شخصیت اصلی» داستان مورد قبول خواننده قرار می‏گیرد، خواننده نسبت به او احساس همدردی و همفکری می‏کند و این «شخصیت اصلی»یا«شخصیت مرکزی»، با نیروهایی که علیه او برخواسته‏اند و با او سر مخالفت دارند، به نزاع و مجادله می‏پردازد. این نیروها ممکن است اشخاص دیگر یا اجسام و موانع یا قراردادهای اجتماعی یا خوی و خصلت خاص خود شخصیت اصلی داستان باشد که با او سر ناسازگاری دارند. بنابراین شخصیت یا شخصیت‏های اصلی، ممکن است با شخصیت یا شخصیت‏های دیگر در بیافتد، یعنی انسان علیه انسان‏های دیگری برخیزد یا شخصیت ممکن است در«کشمکش» با نیروهای خارجی یا موانع طبیعی یا قوانین اجتماعی یا سرنوشت و تقدیر باشد یعنی انسان علیه محیط و سرنوشت خویش عصیان کند، یا شخصیت ممکن است با خودش کشمکش داشته باشد،یعنی انسان علیه خودش طغیان کند یا می‏تواند ترکیبی از همه‏ی این‏ها، در برابر شخصیت بایستد و با او به مقابله بپردازد، همان‏طور که در داستان«داش آکل» ترکیبی از چند نوع کشمکش وجود دارد.
انواع کشمکش
به طور کلی می توان کشمکش را به چهار نوع تقسیم کرد:
*کشمکش جسمانی، وقتی است که دو شخصیت درگیری جسمانی دارندو به زور و نیروی جسمی متوسل می‏شوند؛ مثلاً دو کشتی گیر که با هم کشتی می‏گیرند و زورآزمایی می‏کنند، کشمکش آن‏ها جسمانی و بدنی است.
* کشمکش ذهنی، وقتی است که دو فکر با هم مبارزه می‏کنند‏؛ مثلاً دو شطرنج باز که ساعت‏ها برابر هم می‏نشینند تا همدیگر را شکست دهند،کشمکش آن‏ها ذهنی است.
*کشمکش عاطفی، وقتی است که عصیان و شورشی در میان باشد و درون شخصیت داستان را متلاطم کند، مثل کسی که ساکت نشسته اما در وجودش غوغا و جوششی باشد که ناگهان سر ریز کند و موجب دگرگونی و هیا‏هویی شود، یا شور و سودای عشق که دگرگونی‏های بسیاری در شخصیت‏های داستان به وجود می‏آورد.
*کشمکش اخلاقی، وقتی است که شخصیت داستان با یکی از اصول اخلاقی و اجتماعی سر مخالفت داشته باشد (میرصادقی، ۱۳۸۸: ۷۴-۷۳).
ت) تعلیق (هول و ولا)
تعلیق در واژه به معنی درآویختن، آویزان کردن، معلق کردن، نصب کردن، ترک چیزی بدون لغو کامل و بلاتکلیفی، پیوستن نوشته‌ای به کتاب است.
«تعلیق به‏وجود آورنده پیچیدگی، ابهام هنری و هر نوع بی‏خبری از نتیجه است و موجب انتظار و کشش خواننده برای تعقیب روایت می‏شود. به همین دلیل به محض این‏که خواننده یا شنونده خود را به داستانی می‏سپارد، یک ارتباط زبانی برقرار می‏گردد، و همین ارتباط در ذات خود اشتیاق مخاطب را بردانستن جمله‏ به جمله داستان دامن می‏زند» (مندنی‏پور، ۱۳۸۳: ۱۵۳).
به طور کلی«هول و ولا» ممکن است به دو صورت در داستان به وجود آید. یکی آنکه نویسنده راز سر به مُهری را در داستان پیش بکشد و گره افکنی کند و وضعیت و موقعیتی غیر عادی به وجود آورد که خواننده مشتاق تشریح و توضیح گره گشایی آن بشود؛ یا شخصیت و شخصیت‏های داستان، چه زن و چه مرد را در وضعیت و موقعیت دشواری قرار بدهد به طوری‏که شخصیت میان دو عمل، دو راه، باید یکی را انتخاب کند و گاهی این دو عمل و دو راه هر دو نامطلوب هم هست و انتخاب یکی از این دو راه، توجه خواننده را بیشتر به خود جلب می‏کند.
به طور خلاصه:با افزایش کیفی و کمی پرسش‏ها و فزونی گرفتن کنجکاوی خواننده،داستان به شرایطی می‏رسد که تعلیق نامیده می‏شود. تعلیق محصول شرایطی است که خواننده می‏خواهد آینده داستان را حدس بزند،اما به دلایلی نمی‏تواند. پس ارزش تعلیق به دو نکته وابسته است: اول تحریک حس میل به دانستن ادامه داستان و دوم:عدم توانایی خواننده در پیش بینی ادامه داستان. تعلیق به گفته‏ی بسیاری از نظریه پردازان«خواننده را بر آن می‏دارد تا از خود بپرسد که۱- بعد چه اتفاقی خواهد افتاد یا ۲-چگونه این رویداد پیش می‏آید. از این‏رو او را مجبور می‏کند که برای پیدا کردن جواب پرسش‏های خود‏،خواندن داستان را ادامه دهد (میرصادقی، ۱۳۹۰: ۲۹۶).
ث) نقطه اوج (بزنگاه)
در فرایند داستان آنجا که تنش به اوج می‏رسد و بالاترین نقطه بحرانی داستان اتفاق می‏افتد،قوی‏ترین رابطه حسی بین خواننده و متن پدید می‏آید که نقطه اوج خواند می‏شود. در این نقطه تمام فکر و ذکر و روح خوانندهروی داستان متمرکز می‏شود. کشمکش به بالاترین حد خود می‏رسد و مهم‏ترین رویداد درونی یا بیرونی که ممکن است در لایه‏ی دوم داستان قرار گیرد نه در سطح آن در همین نقطه روی می‏دهد.نقطه اوج یا بزنگاه، نقطه‏ای است در داستان کوتاه، رمان، نمایشنامه و داستان منظوم که در آن بحران به نهایت خود برسد و به گره‏گشایی داستان بینجامد. نقطه اوج داستان، نتیجه منطقی حوادث پیشین است که آبی در زیرزمین جریان داشته و از نظر پنهان مانده است و جاری شدن آب بر زمین پایان ناگزیر آن است؛ منطق مسیر حوادث داستان نیز ممکن است از نظر خواننده پنهان بماند اما وقتی به نتیجه نهایی آن می‏رسد، خواننده آن را می‏پذیرد. اثری ممکن است بزنگاه‏های متعددی داشته باشد، و بزنگاهی قوی‏تر از بقیه باشد، معمولاً این بزنگاه اصلی بر بزنگاه‏های دیگر مقدم است (میرصادقی، ۱۳۹۰: ۲۹۷).
چ) گره گشایی
«گره‏گشایی» چیزی است که جمیز جویس به آن اهمیت می‏داد و از آن به «تجلی» تعبیر می‏کرد (مستور، ۱۳۷۹: ۲۴).
گره‏گشایی به صورت ضربه‏ای و بسیار شک آور حدود۷۰ درصد پتانسیل جذابیت‏،زیبایی شناختی معنایی و…متن را به خود اختصاص می‏دهد.اگر پس از گره گشایی،دقیقأ همان تعادل اولیه حاصل شود،خواننده حس می‏کند که درجازده است و قدمی به جلو بر نداشته است.
داستان ممکن است فاقد گره گشایی باشد، اما به نتیجه‏گیری نیاز دارد. همین‏جا روشن می‏شود که نتیجه‏گیری جامع‏تر، با اهمیت‏تر و فراگیر‏تر از گره گشایی است. نتیجه‏گیری در واقعیت داستانی، نه درس اخلاق است‏، نه ارائه‏ راهکار در این یا آن عرصه. از این‏رو اگر چه در داستان‏های مدرن نتیجه‏گیری آشکاری به چشم نمی‏خورد، یا داستان نتیجه نمی‏گیرد، اما بهر حال خوننده را به نتیجه می‏رساند.
پس از گره گشایی،پایان داستان می‏آید که می‏تواند، قوی‏ترین و مؤثرترین بخش روایت هم باشد. همیشه پایان خوب، پایانی است غیر منتظره و پیش بینی نشده،اما حتمأ به معنای غافلگیر کننده نیست. توضیح مجدد این که: غافلگیری هنگامی پدید می‏آید که آنچه رخ می‏دهد غیر قابل پیش‏بینی است و از حدسیات و فرضیات خواننده فراتر می‏رود و همین صفت‏،آن را از حالت تعلیق و شک و انتظارجدا می‏کند (میرصادقی، ۱۳۹۰: ۲۹۷).
۲-۲-۲٫ شخصیت
در لغت به معنای خصلت‏های اخلاقی و رفتار و منش و در اصطلاح ادبیات داستانی و نمایشی، فردی است که ساخته شده‏ی ذهن نویسنده‏ی داستان باشد(انوشه، ج ۲ ، ۱۳۸۱: ۸۵۹).
«ارسطو اشخاص را که برای آن‏ها ارزش زیادی قائل بود، بازیگران نمایش می‏دانست و درباره آن‏ها چنین می‏نوشت: بنابراین اشخاص را که در صحنه‏ بازی می‏کنند، از آنچه نمایش می‏دهند، قصدشان تقلید سیرت و خصلت اشخاص داستان نیست، بلکه خود به سبب افعال و کرداری که انجام می‏دهند و دارند بدان سیرت و خصلت منسوب می‏شوند، که نتیجه‏ی کردارهای آن‏هاست»(اخوت، ۱۳۷۱: ۱۲۸- ۱۲۷).
«محوری است که تمامیت قصّه (داستان) برمدار آن می‏چرخد و کلیه‏ی عوامل دیگر، عینیّت، کمال، معنا مفهوم و حتی وجود خود را از عامل شخصیت کسب می‏کنند»(براهنی، ۱۳۶۲: ۲۴۲).

دانشگاه آزاد اسلامی
واحد علوم دارویی
دانشکده علوم و فناوریهای نوین
پایان نامه کارشناسی ارشد رشته میکروبیولوژی
طراحی و ساخت واکسن کاندید یونیورسال بر علیه ویروس های پاپیلوماانسانی سویه های ۶٫۱۱٫۱۶٫۱۸٫۳۱٫۴۵
بر پایه پروتئین های L1 و L2
استاد راهنما
دکتر مهدی مهدوی
استاد مشاور
دکتر مجید تبیانیان
نگارنده:
نازیلا قربان حسینی
سال تحصیلی ۱۳۹۳-۱۳۹۲
تشکرو قدردانی :
سپاس خدای را که سخنوران، در ستودن او بمانند و شمارندگان، شمردن نعمت های او ندانند و کوشندگان، حق او را گزاردن نتوانند. و سلام و دورد بر محمّد و خاندان پاک او، طاهران معصوم، هم آنان که وجودمان وامدار وجودشان است؛ و نفرین پیوسته بر دشمنان ایشان تا روز رستاخیز…بدون شک جایگاه و منزلت معلم، اجّل از آن است که در مقام قدردانی از زحمات بی شائبه ی او، با زبان قاصر و دستان ناتوان چیزی بنگاریم اما از آنجایی که تجلیل از معلم، سپاس از انسانی است که هدف و غایت آفرینش را تامین می کند و سلامت امانت هایی را که به دستش سپرده اند، تضمین؛ بر حسب وظیفه
از استاد راهنمای محترم، جناب آقای دکتر مهدی مهدوی که دلسوزانه همپای من در تمامی مراحل این پژوهش تلاش کردند و در حمایت مالی و علمی این پژوهش نقش بسزایی داشتند و من افتخار شاگردی ایشان را داشتم، کمال تشکر و سپاس‌گزاری را دارم.
از استاد فرهیخته و بزرگوار، جناب آقای دکتر مسعود امین زاده، عضو هیات علمی ویروس شناسی و ایمنی شناسی، که در حمایت علمی این پژوهش نقش بسیار زیادی داشتند و در تمامی مراحل من را دلسوزانه همراهی کردند ، نهایت تشکر، قدردانی و سپاس را دارم.
از جناب آقای دکتر مجید تبیانیان که مشاوره این پایان نامه را برعهده داشتند و در حمایت علمی این پژوهش نقش مهمی داشتند، سپاس‌گزارم.
از جناب آقای دکتر مرتضی تقی زاده در موسسه واکسن و سرم سازی رازی کرج، که در همکاری و حمایت علمی و عملی این پژوهش نقش بسزایی داشتند، بسیار سپاسگزار هستم.
از داوران گرانقدر، استاد صبور و با تقوا جناب آقای دکتر مسعود امین زاده و مدیریت محترم گروه سرکار خانم دکتر ستاره حقیقت که زحمت داوری این رساله را متقبل شدند، کمال تشکر و قدردانی را دارم.
از آقای آرین رحیمی، دانشجوی کارشناسی ارشد رشته میکروبیولوژی که در تمامی مراحل من را یاری رساندند، نهایت سپاس و تشکر را دارم.
از خانم مهسا رضایی، دانشجوی کارشناسی ارشد رشته میکروبیولوژی که دلسوزانه از ابتدا در کنار من و پیگیر موضوع پایان نامه بودند، سپاس و قدردانی دارم.
باشد که این خردترین، بخشی از زحمات آنان را سپاس گوید.
تقدیم به:
مادر و پدر مهربانم که افتخار فرزندیشان همواره برایم با لذت چشیدن قطره ای از دریای معرفت همراه بوده است.

و
برادر بسیار عزیزم که همراهی او دلگرمی و ادامه تحصیل را برایم فراهم نمود.
خلاصه
سرطان گردن رحم بعد از سرطان سینه دومین سرطان شایع زنان در سراسر جهان می باشد. بیش از ۹۰% سرطان های گردن رحم ، واجد پاپیلوما ویروس های انسانی (HPV)هستند. بیش از ۱۰۰ نوع مختلف پاپیلوما ویروس انسانی وجود دارد که بیش از ۴۰ گونه ژنوتیپی این ویروس ها، عفونت زا هستند و از آن میان حدود ۱۵ ژنوتیپ، کارسینوژن هستند که تحت عنوان ژنوتیپ های high-risk نام برده می شوند و ژنوتیپ ۱۸ و ۱۶ در بین آنها عامل بیش از ۹۰ % سرطان های مرتبط با این ویروس هستند. پروتئین کپسید L1 پاپیلوما ویروس ها زمانی که در سیستم های بیان کننده پروتئین های یوکاریوتی و پروکاریوتی بیان می شوند ذرات ویروسی مانند غیر عفونی را تشکیل می دهند که باعث القاء پاسخ آنتی بادی خنثی کننده ضد HPVs می شوند. این پروتئین اکنون نیز به عنوان واکسن استفاده می شود و احتمالا وجود پروتئین۲ L در واکسن میتواند از طیف گسترده تری از تیپ های ویروسی پیشگیری کند، هرچند که اپی توپ های خنثی کننده آن شبیه به L1 توانایی حفاظت کنندگی را ندارند اما اپی توپ های آن واکنش های متقاطع را به خوبی القا می نمایند. در حال حاضر واکسن هایی که برای ویروس HPV وجود دارد، نمی تواند تمام سروتیپ های پر خطر آن را پوشش دهد و از لحاظ قیمت نیز پر هزینه است.
در تحقیق حاضر طراحی یک واکسن یونیورسال چند اپی توپی برای پروتئین های ساختمانی اصلی ویروس های HPV که شامل L1/L2 است با بهره گرفتن از استراتژی های ایمونو انفورماتیک در بررسی ۶ نوع پرخطر ویروس HPV سویه های ۶،۱۱،۱۶،۱۸،۳۱،۴۵، تلاش در طراحی و ساخت واکسنی شده است که این سروتیپ ها را پوشش دهد ، در این خصوص اقدام به شناسایی بهترین اپی توپ های برانگیخته کننده لنفوسیت هایB ، برای پیشگیری از وقوع بیماری های مرتبط در جهت مطالعه به عنوان کاندید یونیورسال واکسن شد به این ترتیب با در نظر گرفتن بیشترین سطح تحریک شوندگی لنفوسیت های B- اپی توپ های پروتئین های کپسیدی L1 وL2، از نظر قابل دسترس ترین اپی توپ ها با توجه به طراحی سه بعدی آن ها، در نظر گرفتن نواحی N گلیکوزیله شده، هیدروفیلیسیته و آنتی ژنسیته، بهترین اپی توپ ها شامل بیست اپی توپ بیست اسید آمینه ای انتخاب و پس از آنالیزهای مثبت، ساختار نهایی مشتمل بر چهارصد اسید آمینه به صورت DNA طراحی شد و به صورت ۱۲۰۰ نوکلئوتید ترجمه معکوس گردید، سپس در جهت بهترین بیان در E.coli بهینه سازی شد. آنزیم های برش گر BamHI و HindIII به ابتدا و انتهای توالی اضافه و سپس در غالب یک ساختار ژنی در کنار یکدیگر قرار داده شد. ژن طراحی شده مذکور ، توسط شرکت بیوماتیک سنتز شده و در پلاسمید pET28a کلون گردید. پس از دریافت پلاسمید مذکور، در سلول های E.coli BL21DE3 ترانسفرم گردید. بیان پلاسمید نوترکیب در سلول های باکتری با اضافه نمودن ۱میلی مولار IPTG در طول ۴ ساعت کشت انجام شد و سپس پروتئین توسط ستون کروماتوگرافی Ni-NTA خالص شد و خلوص با تکنیک SDS-page تائید شد و سپس در برابر آنتی بادی anti-His در وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. جهت بررسی ایمنی زایی، واکسن کاندید همراه با ادجوانت فروند ناقص همراه با گروه کنترل PBS به گروه های موشی BALB/c (n=6 ) دو بار و به فاصله ۲ هفته بصورت زیر پوستی تزریق شدند که میزان تزریق در هر سری ۱۰ میکروگرم بود. یک هفته پس از دومین واکسیناسیون موش ها ،توتال آنتی بادی ها به روش الایزای غیر مستقیم ارزیابی شدند. نتایج نشان داد که واکسن کاندید تولید شده در میزبان باکتریایی و خالص شده به وسیله ی Ni-NTA، یک باند در حدود ۴۵ کیلو دالتون در وسترن بلات نشان داد. همچنین واکسیناسیون با واکسن کاندید یونیورسال بر پایه ی L1/L2 HPVs منجر به افزایش قابل توجه در پاسخ ایمنی همورال در مقایسه با گروه کنترل شد.
واژه های کلیدی : پاپیلوما ویروس انسانی، پروتئین کپسید L1 و L2 ، چند اپی توپی، یونیورسال واکسن
فهرست مطالب
عنوان صفحه
فصل اول: مقدمه …………………………………………………………………………………………………………….۱
مقدمه: ۲
فصل دوم: کلیات و مروری بر مطالعات گذشته………………………………………………………………………۸
۲-۱- تاریخچه ۹
۲-۲- طبقه بندی ۱۵
۲-۳- ساختمان ویریون ۱۶
۲-۴- ساختمان و سازماندهی ژنوم ۱۶
۲-۵- تکثیر ویروس ۱۸
۲-۵-۱- اتصال ورود ، پوشش برداری ۱۹
۲-۵-۲- پروموترهای ویروسی و تنظیم نسخه برداری ۱۹
۲-۵-۳ - سرهم بندی و رها شدن ویروس ۲۱
۲-۵-۴- همانند سازی DNA ویروس ۲۱
۲-۶- الحاق DNA ویروسی در ژنوم انسان ۲۳
۲-۷- پروتئین های ویروسی ۲۴
۲-۷-۱- پروتئین های اولیه E1 تا E6 24
۲-۷-۲- پروتئین E7 25
۲-۷-۳- پروتئین های L1 و L2 28